Is speiceas eacnamaíoch tábhachtach é ribí róibéis féir i dtionscal dobharshaothraithe fionnuisce na Síne. Le blianta beaga anuas, áfach, anMicrosporidium hepatopancreatic(EHP), tá tionchar mór ag an tionscal ar an tionscal. Ós rud é nach bhfuil aon druga nó vacsaín éifeachtach ann faoi láthair chun an galar seo a chóireáil, tá braite tapa agus cruinn ríthábhachtach chun a leathadh a chosc.
A.magnified 9. 0 × 1 {0 3 huaire; B. Méadaithe 5.0 × 104 uair.
Qiao Yi, Shen Hui, Wan Xihe, Fan Xianping, Jiang GE, Li Hui, Wang Libao, Shi Wenjun, Cheng Jie. Leithlisiú agus breathnóireacht mhoirfeolaíoch ar mhicrosporidium hepatopancreatic i litopenaeus vannamei. Journal of Iascaigh Eolaíochtaí na Síne, 2018, 25 (5): 1051-1058. Doi: 10.3724/sp.j.1118.2018.17430.
Braitheann braite EHP go príomha ar mhodhanna bitheolaíochta móilíneacha, agus is í teicneolaíocht PCR an ceann is coitianta. Mar sin féin, cé go dtugann PCR íogaireacht ard, teastaíonn trealamh PCR daor agus timpeallacht shaotharlainne speisialaithe uaidh, rud a fhágann nach bhfuil sé oiriúnach d'úsáid allamuigh. Chun aghaidh a thabhairt ar an tsaincheist seo, d'fhorbair an fhoireann taighde dhá mhodh braite gasta bunaithe ar theicneolaíocht Mira. Tairgeann na modhanna seo íogaireacht ard, freagairt thapa, agus oibriú éasca, a chumasaíonn braite éifeachtach agus tapa EHP i ribí róibéis ar an láthair gan gá le trealamh casta saotharlainne, rud a líonann an bhearna i modhanna braite reatha.
Imoibrithe aimplithe a úsáidtear sa staidéar:
- Kit Aimpliú Mear isothermal DNA (BASIC)
- Kit Aimpliú Mear isothermal DNA (cineál stiall óir collóideach)
Is modh aimplithe aigéad núicléasach tapaidh isothermal é Mira Technology. Is éard atá i gceist leis an bpríomhphrionsabal ná gníomh comhordaithe próitéiní ilfheidhmeacha ag teochtaí comhthimpeallacha chun aimpliú aigéid núicléasaigh tapa a bhaint amach, rud a chumasaíonn braite aigéad núicléasach iniompartha, ar an láthair.
Modhanna taighde
Eastóscadh samplach
Bhailigh an fhoireann taighde samplaí ribí róibéis féir ionfhabhtaithe agus sláintiúla ó thrí fheirm ribí róibéis i gCúige Liaoning, ag baint DNA as hepatopancreas an ribí róibéis.
Dearadh príomha
Dearadh trí shraith de phríomhairí Mira ag díriú ar ghéin próitéine S8 serine EHP (uimhir aontachais GenBank: ar 182063). Tá suíomhanna gníomhacha uathúla ag an ngéin seo, ag cinntiú sainiúlacht na braite.
Mira-aois agus braite mira-lfd
(A) Teochtaí imoibriúcháin RPA-Optamaithe. M: DL 500 Marker; N: Rialú diúltach; Strains 1-5: 25 céim, 30 céim, 37 céim, 39 céim, agus 42 céim.
(B) Amanna imoibriúcháin RPA-Optamaithe. M: DL 500 Marker; N: Rialú diúltach; 1: 10 nóiméad; 2: 20 nóiméad; 3: 30 nóiméad; 4: 40 nóiméad.
(C) Teochtaí imoibriúcháin RPA-LFD optamaithe. N: Rialú diúltach; 1: 25 céim; 2: 30 céim; 3: 37 céim; Céim 4: 39; 5: 42 céim.
(D) Amanna imoibriúcháin RPA-LFD optamaithe. N: Rialú diúltach; 1: 5 nóiméad; 2: 10 nóiméad; 3: 20 nóiméad.
Baineadh úsáid as an dá mhodh braite MIRA, Mira-aois (leictreafóiréis ghlóthach agarose) agus MIRA-LFD (imdhíon-imdhíon-imdhíonachta cliathánach ór collóideach), chun EHP a bhrath. Rinne an fhoireann taighde na teochtaí agus na hamanna imoibriúcháin a bharrfheabhsú trí thurgnamh. Mhéadaigh Mira-Aois an sprioc DNA i 30 nóiméad ag 37 céim, agus chríochnaigh Mira-LFD aimpliú i 10 nóiméad ag 37 céim, agus bhí na torthaí inléite laistigh de 5 nóiméad.
Torthaí turgnamhacha
Sainiúlacht agus íogaireacht
(A) Sainiúlacht braite RPA-aois. M: DL 1000 Marker; P: Nosema Bombycis; 1: EHP; 2: encephalitozoon; 3: Microsporidia; 4: Víreas Siondróm Spota Bán; 6: neamhghnácha; N: Rialú diúltach.
(B) Sainiúlacht braite RPA-LFD. P: Nosema Bombycis; N: Rialú diúltach; 1: EHP; 2: encephalitozoon; 3: Microsporidia; 4: Víreas Siondróm Spota Bán; 6: neamhghnácha.
. M: DL 500 Marker; N: Rialú diúltach; 1: 4.7 × 10^5 cóip/µl; 2: 4.7 × 10^4 cóip/µl; 3: 4.7 × 10^3 chóip/µl; 4: 4.7 × 10^2 chóip/µl; 5: 4.7 cóipeanna/µl; 6: 4.7 cóipeanna/µl.
(D) Íogaireacht RPA-LFD le caoluithe grádáin de phlasmids athchuingreach. N: Rialú diúltach; 1: 4.7 × 10^5 cóip/µl; 2: 4.7 × 10^4 cóip/µl; 3: 4.7 × 10^3 chóip/µl; 4: 4.7 × 10^2 chóip/µl; 5: 4.7 cóipeanna/µl; agus 6: 4.7 cóip/µl.
Léirigh na turgnaimh go bhfuil sainiúlacht ard ag teicneolaíocht Mira, ag brath go cruinn ar EHP gan freagairt do phataiginí eile. Maidir le híogaireacht, bhí teorainn braite de 4.7 cóip/µl ag an dá mhodh, i bhfad níos airde ná íogaireacht PCR traidisiúnta.
Tástáil samplach chliniciúil
Léirigh na torthaí ó thástáil 30 sampla cliniciúla go raibh ráta dearfa de 70%ag Mira-Aois agus Mira-LFD, beagán níos ísle ná 80%QPCR ach i bhfad níos airde ná 56.7%traidisiúnta PCR.
Ionchais Iarratais
Ceadaíonn modhanna braite atá bunaithe ar Mira a mhéadú go tapa ar ghéinte sprice ag teochtaí leanúnacha. Go háirithe, is féidir leis an modh Mira-LFD torthaí a sheachadadh i 10 nóiméad gan gá le trealamh casta saotharlainne, rud a chiallaíonn go bhfuil sé oiriúnach d'úsáid ar an láthair i bhfeirmeacha ribí róibéis. Mar gheall ar íogaireacht agus sainiúlacht ard na teicneolaíochta seo, is uirlis éifeachtach í chun EHP a bhrath agus a rialú go luath, rud a chosnaíonn sláinte agus forbairt an tionscail feirmeoireachta ribí róibéis.
I measc na modhanna seo, tá an t-imdhíon-imdhíon-imdhíonachta cliathánach collóideach (MIRA-LFD) an-oiriúnach d'iarratais ar an láthair mar gheall ar a shimplíocht agus a thorthaí iomasach. Is féidir le feirmeoirí ribí róibéis féir ionfhabhtuithe EHP a bhrath agus a fhreagairt go tapa, cumais rialaithe galair a fheabhsú, éifeachtúlacht feirmeoireachta a threisiú go suntasach, agus caillteanais eacnamaíocha a laghdú.